Содержание материала

Реакция лизиса

Многие исследователи давно подметили факт довольно быстрого исчезновения из крови введенных в нее сапрофитов. Учение о бактерицидных свойствах сывороток получило дальнейшее развитие в работах Г. Бухнера, который доказал наличие в нормальной сыворотке бактерицидных свойств к другим микробам (возбудителям брюшного тифа и холеры). Наиболее убедительными были классические опыты Л. М. Исаева и Р. Пфейффера, которые констатировали появление в сыворотке иммунного животного, бактериолизинов.
Термины «бактерицидная» и «бактериолитическая» способность сыворотки определяют один и тот же процесс, так как убивающее (бактерицидное) или убивающее и одновременно растворяющее (бактериолитическое) действие зависит не от различных свойств сыворотки, а от особенностей микроорганизмов.
Под влиянием бактериолизинов микробы сильно изменяются: лишаются подвижности, их тело разбухает, теряя типичную форму, и постепенно они превращаются в круглые образования (шары) и затем в аморфную массу.
При бактерицидном действии сывороток наступает только гибель микробов: при этом они претерпевают сравнительно небольшие морфологические изменения.
Явления бактериолиза можно наблюдать в опыте как in vivo (в организме животного), так и in vitro (в пробирке).
Для наступления бактериолиза необходимо участие двух веществ. Одно из них, быстро разрушающееся при нагревании до 56° и не обладающее специфичностью, называется комплемент. Другое вещество — антитело (лизины), появляющееся в крови при активной иммунизации, стойкое по отношению к температуре. Лизины способны оказывать свое действие только в присутствии дополнительного фактора — комплемента.
Комплемент — это вещество белкового характера, содержащееся в любой свежей сыворотке человека и животных, способствующее лизису (растворению) клеточного антигена (эритроцитов барана, бактерий и т. д.) в присутствии специфической иммунной сыворотки. Он неустойчив, разрушается  при температуре 55—56°, при длительном хранении, действии света, энергичном встряхивании, воздействии некоторых химических веществ. Количество его не повышается в течение процесса иммунизации.
Принято пользоваться в качестве комплемента свежей сывороткой морской свинки.

Реакция гемолиза

Явление лизиса распространяется не только на бактерии, но и другие клеточные элементы — эритроциты, лейкоциты и т. д. При иммунизации животных эритроцитами другого вида в крови появляются антитела — гемолизины, растворяющие данные кровяные тельца. Иммунная сыворотка, содержащая гемолизины, называется гемолитической. Гемолиз, как и бактериолиз, происходит при участии специфического антитела и комплемента. Реакция гемолиза состоит в том, что при воздействии гемолитической сыворотки на соответствующие эритроциты в присутствии комплемента получается их растворение (гемолиз), взвесь эритроцитов превращается в ярко-красную прозрачную жидкость — так называемую лаковую кровь (рис. 57).

Реакция гемолиза
Рис. 57. Реакция гемолиза. а — гемолиз эритроцитов отсутствует; б — полный гемолиз эритроцитов.

В отличие от гемолиза эритроцитов, получаемого каким-либо другим путем (например, действием на эритроциты дистиллированной воды, микробного яда и т. д.), действие иммунной гемолитической сыворотки строго специфично, т. е. она вызывает гемолиз только тех эритроцитов, которые были взяты для иммунизации. Реакция гемолиза благодаря своей демонстративности получила широкое при-менение как вспомогательная реакция при постановке серологических диагностических реакций (реакция связывания комплемента Борде—Жангу, реакция Вассермана). Для постановки реакции необходимо иметь: 1) иммунную гемолитическую сыворотку; 2) антиген — отмытые эритроциты барана в виде 5% взвеси в физиологическом растворе; 3) комплемент — свежую сыворотку морской свинки в разведении 1:10; 4) физиологический раствор.
Реакцию ставят по схеме (табл. 2). После постановки реакции пробирки ставят на 30 минут в термостат при 37°.
Таблица 2
Схема реакции гемолиза


Ингредиенты

№ пробирки

1

2

3

4

5

Гемолитическая сыворотка

0,5

0,5

0,5

Эритроциты барана (антиген)

0,5

0,5

0,5

 

0,5

Комплемент разведения 1:10

0,5

 

0,5

0,5

 

Эритроциты собаки

0,5

Физиологический
раствор

——

0,5

0,5

“““*

1,0

Общий объем

1,5

1,5

1,5

1,5

1,5

Результаты реакции

Гемолиз

Отсутствие гемолиза

Отсутствие гемолиза

Отсутствие гемолиза

Отсутствие гемолиза

В 1-й пробирке произошел полный гемолиз эритроцитов, так как в ней содержатся все компоненты реакции (антитело+антиген+комплемент).
Во 2-й пробирке реакция гемолиза не наступила,несмотря на наличие антитела и антигена, так как в ней отсутствует комплемент.
В 3-й пробирке реакция гемолиза не произошла ввиду отсутствия антитела (гемолитической сыворотки).
В 4-й пробирке проверяется специфичность реакции: гемолиза не произошло, так как в ней специфический антиген (эритроциты барана), заменен другими эритроцитами (эритроциты собаки).
В 5-й пробирке проверяется стабильность эритроцитов, содержащихся в физиологическом растворе при температуре 37° в течение часа; спонтанного гемолиза не наступило.